影響質(zhì)粒DNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的原因

影響質(zhì)粒DNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率因素

1、質(zhì)粒大小和轉(zhuǎn)染量：在一般情況下，隨插入片段長(zhǎng)度的增加轉(zhuǎn)染效率降低；而轉(zhuǎn)染效率在一定的范圍內(nèi)與質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量呈正相關(guān)。

2、DNA質(zhì)量：高質(zhì)量的DNA對(duì)于轉(zhuǎn)染的效率至關(guān)重要。如果質(zhì)粒不純會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成，進(jìn)而影響轉(zhuǎn)染效率。因此，可以選擇提取純度較高的試劑盒對(duì)DNA進(jìn)行提取和純化，以得到更高質(zhì)量的DNA，從而提高轉(zhuǎn)染效率。

3、轉(zhuǎn)染試劑的選擇：轉(zhuǎn)染試劑將外源核酸片段導(dǎo)入細(xì)胞，影響內(nèi)源基因表達(dá)水平。在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑，例如在綿羊成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中FuGene HD的轉(zhuǎn)染效率更高，GenEscortTM I對(duì)小鼠膠質(zhì)細(xì)胞則具有更好的轉(zhuǎn)染效果。總之，可以遵循高效、低毒等原則進(jìn)行選擇。

4、質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑比例：在一定范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率與質(zhì)粒/轉(zhuǎn)染試劑比值成正相關(guān)，但毒性也會(huì)增加?？梢愿鶕?jù)轉(zhuǎn)染試劑推薦比例確定合適的合適的轉(zhuǎn)染比例。

5、細(xì)胞狀態(tài)：維持細(xì)胞生長(zhǎng)及健康旺盛是提高轉(zhuǎn)染效率的重要條件。建議選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞為佳，此時(shí)期的細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，可能得到更高的轉(zhuǎn)染效率，切勿選擇傳代次數(shù)過(guò)多，基因型可能發(fā)生改變的細(xì)胞。

6、細(xì)胞密度：細(xì)胞密度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果，過(guò)高則難以轉(zhuǎn)染，過(guò)低則容易導(dǎo)致細(xì)胞死亡，因此需要選擇合適的細(xì)胞融合密度進(jìn)行轉(zhuǎn)染，一般來(lái)說(shuō)細(xì)胞密度在60%-80%時(shí)轉(zhuǎn)染較為理想，但具體密度可參考轉(zhuǎn)染試劑的說(shuō)明書進(jìn)行操作。

7、血清：血清中含有大量的蛋白質(zhì)，可能會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率。一般的轉(zhuǎn)染試劑會(huì)要求轉(zhuǎn)染時(shí)使用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染完成后更換完全培養(yǎng)基。但現(xiàn)在有些新的轉(zhuǎn)染試劑血清的存在已不造成威脅，甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染效率，如陽(yáng)離子聚合物等。

8、抗生素：抗生素，如青霉素和鏈霉素，一般是作為培養(yǎng)基中的添加物來(lái)防止細(xì)胞污染。這些抗生素對(duì)于真核細(xì)胞沒有毒性，但是轉(zhuǎn)染時(shí)有些轉(zhuǎn)染試劑增加了細(xì)胞的通透性使抗生素進(jìn)入細(xì)胞，可能會(huì)間接導(dǎo)致細(xì)胞死亡，從而降低轉(zhuǎn)染效率?？梢愿鶕?jù)轉(zhuǎn)染試劑的要求來(lái)選擇是否在培養(yǎng)基中添加抗生素。

質(zhì)粒DNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染注意事項(xiàng)

線性化還是超螺旋會(huì)影響轉(zhuǎn)染結(jié)果：超螺旋質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率比線性DNA高得多，特別是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。而線性化DNA轉(zhuǎn)染的整合幾率高。質(zhì)粒太大了轉(zhuǎn)染會(huì)困難一些。畢竟，相對(duì)致密、較小的外源異物被細(xì)胞內(nèi)吞的幾率要大一些。

如果你的質(zhì)粒正好比較大，又沒有經(jīng)驗(yàn)，選擇特別注明可以轉(zhuǎn)大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染試劑成功幾率會(huì)高一些。有的轉(zhuǎn)染試劑還會(huì)提供一些促進(jìn)DNA凝聚的成分，使得DNA形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)更致密一些，更容易轉(zhuǎn)染一些。純化質(zhì)粒的質(zhì)量也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率，一定要選擇高質(zhì)量的質(zhì)粒。