原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)基本操作步驟

原代細(xì)胞可用來(lái)轉(zhuǎn)染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以?xún)?nèi)的小分子 RNA 和 DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞。目前，無(wú)論國(guó)外還是國(guó)內(nèi)，原代細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個(gè)熱點(diǎn)難題，市場(chǎng)還缺乏真正有效的商品化的原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。原代細(xì)胞能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對(duì)一些活體寄生蟲(chóng)幼蟲(chóng)，也能獲得較為理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。對(duì)于大多數(shù)原代細(xì)胞，RFect PM 細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率都在 80%以上，而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到 10%。

原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)基本步驟

1、器官和組織的選擇

盡可能的去除不必要的組織和血跡。

2、原代細(xì)胞的分離

（1）應(yīng)用PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒I、II、III。

（2）根據(jù)組織來(lái)源不同，可選用不同的PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒。

3、原代細(xì)胞的培養(yǎng)：

（1）PriCells原代細(xì)胞特制培養(yǎng)基

（2）PriCells原代細(xì)胞特制添加物

（3）優(yōu)質(zhì)胎牛血清

4、細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定：

PriCells原代細(xì)胞鑒定試劑盒

4、原代細(xì)胞的傳代、保存

（1）傳代：依椐細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，生長(zhǎng)的細(xì)胞1：2或1：3進(jìn)行傳代。

（2）保存：DMSO＋培養(yǎng)液＋血清

按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘）→冰箱冷凍室（30分鐘）→超低溫冰箱（－80℃過(guò)夜）→液氮。

5、原代細(xì)胞的復(fù)蘇

（1）取出細(xì)胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。

（2）吸出細(xì)胞懸液，并加10倍以上培養(yǎng)液。

（3）用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶，放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。