人H-ras ELISA Kit實驗原理

人H-ras ELISA Kit用途
該試劑盒采用“一步”夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞或其他相關(guān)生物液體中H-ras濃度。

檢測原理
將目標抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的目標連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入辣根過氧化物酶標記的抗體，將未結(jié)合的抗體洗凈后再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

反應類型    雙抗夾心法
規(guī)格    96T/48T
中文名稱    人H-ras ELISA試劑盒
反應時間    1.5 h
檢測方法    酶聯(lián)免疫吸附測定
檢測范圍    0.25 ng/mL – 8 ng/mL
靈敏度    0.1 ng/ml
上樣體積    50 μL/孔
樣本類型    血清、血漿、組織、細胞上清或其他生物樣本

特異性
可檢測樣本中的H-ras , 且與其它類似物無明顯交叉反應。

重復性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
 
批內(nèi)差
取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測，每份樣本連續(xù)測定20次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。

批間差
選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復測定8次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值

精密度
精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批間差: CV<13%

穩(wěn)定性
經(jīng)測定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。

試劑盒的組成
▲未開封試劑盒，4℃保存；已開封，標準品-20℃保存，酶標板加干燥劑后密封-20℃保存，其他4℃保存。
英文名稱    中文名稱    規(guī)格    規(guī)格
Microe isa stripplate    包被微孔板    96T    48T
Standard    標準品    0.3ml/管*6    0.3ml/管*6
HRP-Corjugate    HRP標記抗體    10mL    5mL
Sample Diluent    樣本稀釋液    6mL    3mL
Chromogen SolutionA    底物液A    6mL    3mL
Chromogen SolutionB    底物液B    6mL    3mL
Stop Solution    終止液      6mL    3mL
20× Wash Solution    20×濃縮洗滌液    25mL    15mL
Product Description    說明書    1份    1份
Sealing film    封板膜    2張    2張

實驗所需自備物品
1、450±10nm濾光片酶標儀（建議儀器使用前預熱）  
2、高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   
3、Eppendorf 移液器.   
4、蒸餾水或去離子水.   
5、脫脂棉吸水紙.   
6、37℃恒溫箱.  
7、100ml和1000ml量筒.