人乳酸脫氫酶(LDH) ELISA Kit使用說明書
2024-03-05 11:57 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
人乳酸脫氫酶(LDH)ELISA試劑盒:(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))
原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人LDH單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的LDH與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人LDH,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,最后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,LDH濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中LDH濃度。
試劑盒組成(2-8℃保存)
酶標(biāo)板(CoatedWells) 96孔 酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate) 12ml
10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer) 12ml 20×濃縮洗滌液(WashBuffer) 50ml
標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):80U/瓶 2瓶 底物工作液(TMBSolution) 12ml
第一抗體工作液(BiotinylatedAntibody) 12ml 終止液(StopSolution) 12ml
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。
2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成80000U/L的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,第一管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在第一管中加入80000U/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。
3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
檢測(cè)程序
1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。
3.每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4.洗板:同前。
5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6.洗板:同前。
7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8.每孔加入100ul終止液混勻。
9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2.以標(biāo)準(zhǔn)品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0U/L為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)LDH含量。
試劑盒性能
1.靈敏度:最小的LDH檢測(cè)濃度小于60U/L。
2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人LDH。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.2%。
注意事項(xiàng)
1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。
3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!