人本周蛋白(BJP) ELISA Kit說明書

中文名稱：人本周蛋白(BJP)ELISA試劑盒
英文名稱：HumanBence-Jonesprotein,BJP ELISA Kit

檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)來檢測樣品的濃度。往預(yù)先包被捕獲抗體的包被微孔中,依次加入樣本、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并 洗滌。再用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與檢測樣品中檢測物的濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中檢測物的含量。

試劑盒組成：
1、30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2、酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(240 ng/L) 0.5ml×1瓶
3、酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶

試驗所需自備物品
1.酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)
2.高精度移液器,EP管及一次性吸頭
3.37°C恒溫箱,雙蒸水或去離子水
4.吸水紙

操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40Щ,然后再加待測樣品10u(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100u,空白孔除外,
4.溫育:用封板膜封板后罟37”C溫育60分鐘,
5.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,
6.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50m,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘8.終止:每孔加終止液50m,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
9.測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行