大腸桿菌DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞使用說明書

中文名稱：大腸桿菌DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱：E.coli DH5α Chemical Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格：0.1mL*10

本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α是一種常用于質(zhì)?？寺〉木?，其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率不低于107，適用于高效的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

本菌種來源于Hoffman-Berling 1100菌種。
 

基因型	表現(xiàn)型
deo R	組成型合成脫氧核糖
end A1	核酸內(nèi)切酶I缺失
gyr A96	具有萘啶酮酸抗性
hsd R17	限制性酶EcoK缺失
△(lac)U169	lac基因缺失
rec A1	DNA重組活性降低
Rel A1	允許在無蛋白質(zhì)合成時(shí)有RNA合成
sup E44	抑制琥珀突變突變，為某些噬菌體必需
thi-1	不能自身合成硫氨
φ80(lac ZΔM15)	提供α-互補(bǔ)所需的ω片斷

儲(chǔ)存條件：干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。

使用方法：
1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。
以下實(shí)驗(yàn)以50μL感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個(gè)離心管中加入800μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，200rpm(小于225rpm)振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

注意事項(xiàng)：
1、涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可通過離心(4,000rpm ，2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。