人巨噬細(xì)胞活化因子(MAF)ELISA試劑盒使用說明書

產(chǎn)品名稱：人巨噬細(xì)胞活化因子(MAF)ELISA試劑盒

英文名稱：Human macrophageactivatingfactor,MAF ELISA kit

規(guī)格：96T/48T

檢測(cè)方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）

待測(cè)樣本：血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等

用 途：用于定量檢測(cè)人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中人T細(xì)胞生長(zhǎng)因子-Ⅲ（TCGF-Ⅲ）Elisa試劑盒的含量。

保存條件：2-8℃低溫保存

保質(zhì)期：六個(gè)月

使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中的指標(biāo)含量。

實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中指標(biāo)水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。

試劑盒組成
1    30倍濃縮洗滌液    20ml×1瓶    7    終止液    6ml×1瓶
2    酶標(biāo)試劑    6ml×1瓶    8    標(biāo)準(zhǔn)品    0.5ml×1瓶
3    酶標(biāo)包被板    12孔×8條    9    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液    1.5ml×1瓶
4    樣品稀釋液    6ml×1瓶    10    說明書    1份
5    顯色劑A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2張  
6    顯色劑B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1個(gè)

操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可在小試管中進(jìn)行稀釋。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。