人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟

中文名稱：人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA檢測(cè)試劑盒

英文名稱： Human plasminogen activator,PLGA elisa kit

規(guī)格：96T/48T

試劑盒成分：酶標(biāo)板，試劑，標(biāo)準(zhǔn)品等。

種屬：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELISA試劑盒等

用途：用于定量檢測(cè)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中人纖溶酶原激活劑PLGA的含量。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟包括：從包被，封閉，加樣，洗滌，加顯色底物，終止液加入，到讀書(shū)操作，還有標(biāo)準(zhǔn)曲線制作等詳盡的操作說(shuō)明。

試劑盒組成及試劑配制:

1. 產(chǎn)品僅用于科研酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。

3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6. 生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

操作流程如下：

（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 （2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，*終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。

注：所用溶液配方

(1) PBS：稱取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl，加雙蒸水至1000ml。

（2）包被緩沖液：稱取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3，加雙蒸水至 1000m1。

（3）洗滌液(PBST)：含0.05% Tween-20的PBS。

（4）稀釋液：含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS，主要用以稀釋抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、樣品。

（5）TMB顯色液：稱取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g檸檬酸，加雙蒸水至1O0ml，配成檸檬酸-磷酸緩沖溶液。用10.5 ml 檸檬酸-磷酸緩沖溶液溶解1錠TMB，再加入35μl 3% H2O2

（6）細(xì)胞裂解液：1% TritonX-100，137mmol/L NaCl，20mmol/L Tris-HCl，2mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF，pH 7.4。（其中PMSF溶于異丙醇中，配成1O mmo/L，-20℃ 貯存?zhèn)溆谩?/div>

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