紫外吸收法定量蛋白質的優(yōu)缺點介紹

1．蛋白質測定的Folin-酚比色法（即Lowry法）的定量范圍為5～100μg蛋白質，靈敏度高；但操作要費較長時間，且Folin試劑顯色反應由酪氨酸、色氨酸和半胱氨氨酸引起，因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用；不同蛋白質因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強度也稍有不同。 紫外吸收法測蛋白質含量迅速、簡便、不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。因此，已在蛋白質和酶的生化制備中廣泛采用，尤其在柱層析分離純化中，常用280nm進行紫外檢測，來判斷蛋白質吸附或洗脫情況。

但該法的缺點是：

（1）對于測定那些與標準蛋白質中酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質，有一定的誤差。故該法適于測定與標準蛋白質氨基酸組成相似的蛋白質。

（2）若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物質，會出現(xiàn)較大干擾。例如，在制備酶的過程中，層析柱的流出液中有時混雜有核酸，應予以校正

2．當樣品中含有核酸類雜質，可以根據(jù)核酸在260nm波長處有最強的紫外光吸收，而蛋白質在280nm處有最大的紫外光吸收的性質，通過計算可以適當校正核酸對于測定蛋白質濃度的干擾作用。但是，因為不同的蛋白質和核酸的紫外吸收是不相同的，雖然經(jīng)過校正，測定結果還存在著一定的誤差