【免疫熒光】血清封閉的選擇看這篇就夠啦！

封閉血清用于免疫組化（IHC）或者免疫熒光（IF）實驗中樣本的封閉，降低背景，減少假陽性。遠慕提供多種屬封閉血清，液體形式產(chǎn)品（原液），無需溶解，用PBS直接稀釋即可使用，低防腐劑含量，對細胞和蛋白的毒性/影響更小。
什么是封閉血清

封閉血清就是將養(yǎng)殖的非免疫的正常動物采血，然后不加抗凝劑，血液凝固，血塊收縮，析出的淡黃色液體。經(jīng)過特殊工藝處理后的血清，特別適在各類免疫學(xué)實驗中用于封閉處理， 比如：IHC、IF/ICC、ELISA等。

血清與血漿的區(qū)別

血漿是指血液中除去細胞成分后剩下的淡黃色或無色半透明液體，一般需要經(jīng)過抗凝處理 。血清與血漿的區(qū)別在于血清中不含某些在凝血過程中被消耗的凝血因子如纖維蛋白原，增添了在血液 凝固過程中由血管內(nèi)皮細胞和血小板所釋放的化學(xué)物質(zhì)。

正常驢血清

正常山羊血清

正常兔血清

正常大鼠血清

正常小鼠血清

特點：

用于免疫組化（IHC）或者免疫熒光（IF）實驗中樣本的封閉，降低背景，減少假陽性。

液體形式產(chǎn)品（原液），無需溶解，用PBS直接稀釋即可使用，低防腐劑含量，對細胞和蛋白的毒性/影響更小。

為什么需要封閉

封閉步驟可減少一抗和二抗與非靶標位點進行非特異性結(jié)合時所產(chǎn)生的本底信號。理想情況是，封閉劑將占據(jù)樣本中的“黏性”位點，比如暴露的帶電性或疏水性蛋白表面，同時不會干擾一抗/二抗識別靶表位，從而盡可能提高信噪比(S/N)。

封閉血清效果

封閉血清適用于免疫組化或者免疫熒光實驗中樣本的封閉?？梢苑忾]待檢樣本中與蛋白質(zhì)非特異性結(jié)合的位點，另外還可以封閉樣品中內(nèi)源性的Fc片段結(jié)合位點，阻斷抗體與樣品中的Fc受體結(jié)合，從而降低背景，減少假陽性。對于適用多抗的實驗，二抗種屬來源的正常血清是封閉處理的金標準。

封閉血清使用方法

推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細胞涂片上，37℃度孵育10-30分鐘，清除血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過夜。

遠慕實用Tips：

最佳的稀釋比例需研究者通過實驗來確定。建議的起始稀釋比例如下：IHC-p（1：10-20）；IF / ICC（1：10-20）；ELISA（1：100）。

封閉用血清中不能含有目標蛋白，且與一抗來源不同，可用與二抗相同來源的封閉血清。

封閉結(jié)束后，用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加一抗。

每張切片需要量，可以參考50ul PBS + 5ul 血清 來計算。

如何如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損：

將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。長時間儲存在2～8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復(fù)凍融。如果開蓋后未使用完，我們建議存放于4℃，但請勿超過一個月。