液體培養(yǎng)基中細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟

　　實(shí)驗(yàn)步驟

　　一、過(guò)夜培養(yǎng)

　　1.  將5 ml預(yù)熱的液體培養(yǎng)基移入一無(wú)菌的16 mm或18 mm管中。

　　2.  用接種環(huán)挑一個(gè)單菌落，浸沒(méi)于培養(yǎng)液中并輕輕振動(dòng)接種環(huán)，使待接種的細(xì)菌分散在培養(yǎng)液中。

　　3.  蓋好試管，在搖床或轉(zhuǎn)鼓式培養(yǎng)裝置上以60 r/min速度，于37°C培養(yǎng)至飽和（1X109~ 2X109 細(xì)胞 /ml，>6 h）。

　　二、大體積培養(yǎng)

　　1.  在一無(wú)菌的Erlenmeyer或baffle瓶中，用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)液按I1: 100的比例稀釋過(guò)夜培養(yǎng)物，燒瓶的體積應(yīng)該是培養(yǎng)液體積的5倍以上。

　　如果不搖動(dòng)培養(yǎng)，所用燒瓶的體積應(yīng)比培養(yǎng)液體積大20倍以上，以確保足夠的通氣。

　　2.  37°C，劇烈搖動(dòng)培養(yǎng)（約300 r/min)。

　　三、利用計(jì)數(shù)板監(jiān)測(cè)生長(zhǎng)情況

　　1.  用一片干凈的蓋玻片蓋住一片干凈的計(jì)數(shù)玻片（或者血球計(jì))。

　　2.  小心地將一小滴培養(yǎng)液滴到蓋玻片的邊緣，這樣培養(yǎng)液可擴(kuò)散人蓋玻片下。

　　3.  在相差顯微鏡400倍下觀察，并且按一個(gè)小方塊中所見(jiàn)的每個(gè)細(xì)菌大約相當(dāng)于2X107 細(xì)胞/ml計(jì)算細(xì)菌濃度。

　　四、利用分光光度計(jì)監(jiān)測(cè)生長(zhǎng)情況

　　因?yàn)閮x器的差異性，分光光度計(jì)應(yīng)該用一已知濃度的培養(yǎng)液進(jìn)行校準(zhǔn)。

　　1.  測(cè)OD600。為了獲得一個(gè)準(zhǔn)確的讀數(shù)，稀釋培養(yǎng)液至OD600＜1。

　　2.  按每0. 1 OD值大約相當(dāng)于108 細(xì)胞/ml計(jì)算細(xì)菌濃度。