液體培養(yǎng)基中細菌培養(yǎng)實驗步驟

　　實驗步驟

　　一、過夜培養(yǎng)

　　1.  將5 ml預熱的液體培養(yǎng)基移入一無菌的16 mm或18 mm管中。

　　2.  用接種環(huán)挑一個單菌落，浸沒于培養(yǎng)液中并輕輕振動接種環(huán)，使待接種的細菌分散在培養(yǎng)液中。

　　3.  蓋好試管，在搖床或轉鼓式培養(yǎng)裝置上以60 r/min速度，于37°C培養(yǎng)至飽和（1X109~ 2X109 細胞 /ml，>6 h）。

　　二、大體積培養(yǎng)

　　1.  在一無菌的Erlenmeyer或baffle瓶中，用新鮮預熱的培養(yǎng)液按I1: 100的比例稀釋過夜培養(yǎng)物，燒瓶的體積應該是培養(yǎng)液體積的5倍以上。

　　如果不搖動培養(yǎng)，所用燒瓶的體積應比培養(yǎng)液體積大20倍以上，以確保足夠的通氣。

　　2.  37°C，劇烈搖動培養(yǎng)（約300 r/min)。

　　三、利用計數板監(jiān)測生長情況

　　1.  用一片干凈的蓋玻片蓋住一片干凈的計數玻片（或者血球計)。

　　2.  小心地將一小滴培養(yǎng)液滴到蓋玻片的邊緣，這樣培養(yǎng)液可擴散人蓋玻片下。

　　3.  在相差顯微鏡400倍下觀察，并且按一個小方塊中所見的每個細菌大約相當于2X107 細胞/ml計算細菌濃度。

　　四、利用分光光度計監(jiān)測生長情況

　　因為儀器的差異性，分光光度計應該用一已知濃度的培養(yǎng)液進行校準。

　　1.  測OD600。為了獲得一個準確的讀數，稀釋培養(yǎng)液至OD600＜1。

　　2.  按每0. 1 OD值大約相當于108 細胞/ml計算細菌濃度。