實驗室常用多種緩沖液配置方案

1、1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)

組份濃度：1 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。

2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?br>
3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。

PH值     濃HCl

7.4     約70ml

7.6     約60ml

8.0     約42ml

4. 將溶液定容至1 L。

5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。

2、10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。

1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0）     100ml

500mM EDTA(PH8.0)     20ml

2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。

3. 將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。

4. 室溫保存。

3、1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

組份濃度：1.5 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。

2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?br>
3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。

4. 將溶液定容至1 L。

5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。

4、3 M 醋酸鈉(pH5.2)

組份濃度：3M 醋酸鈉

配制量：100ml

配制方法：

1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?br>
2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.2

3.加去離子水將溶液定容至100ml

4高溫高壓滅菌后，室溫保存。

5、PBS Buffer

組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

配制量：1 L

配制方法：

1. 稱量下列試劑，置于1 L燒杯中。

NaCl     8g

KCl     0.2g

Na2HPO4     1.42g

KH2PO4     0.27g

2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?br>
3. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。

4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

6、10 M 醋酸銨

組份濃度：10 M 醋酸銨

配制量：100 ml

配制方法：

1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100～200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?br>
2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

3. 使用0.22 mm濾膜過濾除菌。

4. 密封瓶口于室溫保存。

注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。

7、苯ben酚/lv仿/yi戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法：

1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯ben酚/lv仿/yi戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。

2. 配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的lv仿/yi戊醇（24 : 1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8、10％ (W/V) SDS

組份濃度：10％ (W/V)SDS

配制量：100ml

配制方法：

1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68℃加入溶解

2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2

3.將溶液定容至100ml后，室溫保存。

9、2 N NaOH

組份濃度：2 N NaOH

配制量：100 ml

配制方法：

1. 量取80 ml去離子水置于100～200 ml塑料燒杯中（NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。

2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。

3. 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。

4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。

10、2.5 N HCl

組份濃度：2.5 N HCl

配制量：100 ml

配制方法：

1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸（11.6 N)，均勻混合。

2. 室溫保存。

11、5 M NaCl

組份濃度：5 M NaCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。

2. 加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。

3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

12、20％ (W/V) Glucose

組份濃度：20％ (W/V) Glucose

配制量：100 ml

配制方法：

1. 稱取20 g Glucose置于100～200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后，攪拌溶解。

2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

13、Solution I(質(zhì)粒提取用)

組份濃度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。

1M Tris-HCl（PH8.0）     25ml

0.5M EDTA（PH8.0）     20ml

20％Glucose（1.11M）     45ml

dH2O     910ml

2. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。

14、Solution II(質(zhì)粒提取用)

組份濃度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS

配制量：500ml

配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml燒杯中

10％ SDS 50ml

2N NaOH 50ml

2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻

3.室溫保存，此溶液保存時間最好不要超過一個月

注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌

15、Solution III(質(zhì)粒提取用)

組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH

配制量：500 ml

配制方法：

1. 稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。

KOAc                      147g

CH3COOH     57.5ml

2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。

3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。

4. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

16、0.5 M EDTA(pH8.0)

組份濃度：0.5 M EDTA

配制量：1 L

配制方法：

稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L燒杯中。

2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?br>
3. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0（約20 g NaOH)。

注意：pH值至8.0時，EDTA才能完全溶解。

4. 加去離子水將溶液定容至1 L。

5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。

6. 室溫保存。

17、1 M DTT

組份濃度：1 M DTT

配制量：20 ml

配制方法：

1. 稱取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。

2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm濾器過濾除菌。

3. 適量分成小份后，-20℃保存。

18、10 mM ATP

組份濃度：10 mM ATP

配制量：20 ml

配制方法：

1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。

2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。

3. 適量分成小份后，-20℃保存。